高保真DNA聚合酶

04NC00015

产品介绍 本产品包括通过基因改造技术实现快速扩增和超⾼保真的 DNA 聚合酶，延伸速度可达 4 kb/min。同时含 有 dNTPs、Mg2+、优化的反应缓冲液、PCR 反应的稳定剂等，浓度为 2×。由于使⽤的超⾼保真 DNA 聚 合酶具有极强的 3' → 5' 外切酶活性，与普通⾼保真酶相⽐，保真性更⾼，是普通 Taq DNA Polymerase 的 100 倍以上。DNA 扩增时，只需加⼊模板、引物和⽔，使 SuperMix 溶液的浓度为 1× 即可进⾏反应。 扩 增产物为平端，可直接⽤于⽆缝克隆实验。同时，反应产物可直接上样，通过琼脂糖凝胶电泳检测。本产品 包含红⾊电泳指示剂，指示带在 1% 琼脂糖凝胶中的迁移速率与 1.5 kb 双链线性 DNA 相当。 适用 范围 1. 超⾼保真 PCR 快速扩增，平端克隆，⽆缝克隆实验，基因定点突变。 2. 低丰度模板、复杂模板或富含 GC/AT 模板的扩增。 3. ⻓⽚段扩增 产品特色 Ø 减少 PCR 操作时间 Ø 避免因多步操作带来的污染 Ø 优化的缓冲液，可⽤于低丰度模板、复杂模板或富含 GC/AT 模板的扩增 Ø 基因组 DNA ⽚段的扩增(≤15 kb) Ø Plasmid DNA ⽚段的扩增(≤15 kb) Ø 热启动，⾼特异性 操作说明 推荐 PCR 体系（以 50ul 反应体系为例） 名称 体积 终浓度 2 X M7 Max Super Mix (Dye Plus) a 25ul 1 X 10 μM Forward Primer 1ul 0.2 uM 10 μM Reverse Primer 1ul 0.2 uM PCR-grade Water As Required - Template b As Required As Required 总体积 50ul - a. 使⽤时彻底融化、混匀。 b. 不同模板最佳反应浓度有所不同，下表为 50 ul 体系推荐的模板⽤量: 模板种类 模板起始量 基因组 DNA 10 - 400 ng 质粒 DNA 10 pg - 5 ng 病毒 DNA 10 pg - 10 ng cDNA 1 - 5 ul PCR 条件 Step Temperature Duration Cycles Initial Denaturation 98°C 30 sec 1 Denaturation 98°C 10 sec 25-35 Annealing c 55-65°C 30 sec 25-35 Extension 72°C 15-30 sec/kb 25-35 Final Extension 72°C 5 min 1 c. 推荐使⽤退⽕温度 60°C。 保存条件 -20 保存，有效期 24 个⽉。 保存条件常⻅问题与解决 ⽅ 案 Ø ⽆产物或产物量少 1) 重复实验避免加样错误 2) 优化引物设计 3) 设置退⽕温度梯度，优化合适的退⽕温度 4) 使⽤⾼纯度模板并适当增加模板⽤量 5) 适当增加延伸时间 6) 增加循环数⾄ 35 - 40 个循环 7) 增加 Mg2+ 浓度⾄ 3-4mM Ø 有⾮特异性扩增产物或弥散条带 1) 设置退⽕温度梯度，优化合适的退⽕温度 2) 降低引物浓度⾄终浓度为 0.2 μM 3) 优化引物设计 4) 适当减少延伸时间 5) 减少扩增循环数⾄ 25 - 30 个循环 6) 使⽤⾼纯度模板并适当减少模板⽤量