一步法高效逆转录试剂盒

04NC00017

产品介绍 NCMScript All-in-One RTpremix with dsDNase 一款含去除基因组酶的一管式高效逆转录产品，可将 RNA 逆转 录成为 cDNA，含有第一链 cDN 合成所需的所有试剂，只需加入 RNA 模板和水即可进行逆转录反应。合成 的第一链 cDNA(最长可达 15kd)可广泛用于文库构建、第二链合成、杂交、PCR 扩增、 RT-qPCR 检测等。 产品组分 组成成分 M7010 M7100 5× RT Mix a 40ul 400ul All-in-one Enzyme Mix b 30ul 300ul DEPC-treated H 2 O 400ul 2×1 ml a. 包含 Buffer、dNTPs、Random Hexamer Primer/Oligo (dT)20 Primer Mix。 b. 包含 ExonScript Reverse Transcriptase、Ribonuclease Inhibitor 和 dsDNase。 操作步骤 1. 在 RNase-free 离心管中配制如下混合液，轻轻混匀并瞬离以下成分: 成分 体积 10 pg- 5 μg Total RNA or 10 pg- 500 ng mRNA c 按需 DEPC-treated H 2 O up to 13ul 5×RT Mix d 4ul All-in-one Enzyme Mix 3ul 总体积 20ul c. 为保证逆转录成功，请使用高质量 RNA 模板。 d. 5× RT Mix 在使用前需充分混匀。 2. 按照下表所示进行逆转录反应: 反应温度 反应时间 目的 37°C e 2min 随机引物与RNA 模板配对及去除基因组DNA 55°C 15min 逆转录反应及 dsDNase快速灭活 85°C 5min 逆转录酶灭活 e. 复杂模板可以采用 25°C 10 min ，充分让引物和模板结合。 3. 产物可立即用于 PCR 或 qPCR ，或 -20°C 保存半年内使用；长期建议分装在 -70°C 保存； cDNA 避免反复冻融。 运输和保存方式 冰袋低温运输；-20°C 保存两年。