ELISA实验标准操作规程

1. 实验原理

酶联免疫吸附测定（ELISA）是一种基于抗原-抗体特异性反应的检测技术。通过酶标记的抗体与固相载体上的抗原或抗体结合，加入底物后酶催化底物显色，通过测定吸光度值进行定量分析。

2. 试剂准备

• 包被缓冲液：pH 9.6 碳酸盐缓冲液
• 洗涤液：PBST（含0.05% Tween-20）
• 封闭液：1% BSA/PBS
• 底物液：TMB显色液
• 终止液：2M H2SO4

3. 操作步骤

1. 包被：将抗原/抗体用包被缓冲液稀释后加入酶标板，4°C过夜
2. 洗涤：弃去包被液，洗涤3次
3. 封闭：加入封闭液，37°C孵育1小时
4. 加样：加入待检样品，37°C孵育1小时
5. 加酶标抗体：加入HRP标记抗体，37°C孵育1小时
6. 显色：加入TMB底物，室温避光显色15分钟
7. 终止：加入终止液，立即在450nm测定OD值